DWD-1 UV-detector (high performance dual beam dual wavelength) met ingebouwde gegevensverwerking

Golflengtebereik: 254nm, 280nm (tegelijkertijd detectie), een andere optie tussen 254nm, 280nm-400nm spectrale lijnen om twee golflengten tegelijkertijd te detecteren.

Kenmerken van het DWD-1 instrument

Eiwit 280nm/254nm dubbele golflengte bepaling:

Eiwitmoleculen bevatten aromatische aminozuren zoals conjugeerde dubbele bindingen van tyrosine en triane. Ze hebben de eigenschap van het absorberen van ultraviolet licht, zijn absorptie piek op 280 nm golflengte, en in deze golflengte absorptie piek optische dichtheid waarde in positieve verhouding tot de concentratie, dus kan worden gebruikt als basis voor eiwit kwalitatieve, kwantitatieve bepaling, daarom wordt de ultraviolette absorptie methode op 280 nm meestal gebruikt voor de continue controle van de eiwitconcentratie in het stratificatiesysteem. Maar omdat het gehalte aan tyrosine en triane in verschillende eiwitten verschilt, is het noodzakelijk om de hoeveelheid nauwkeurig te bepalen om het zuivere eiwit te vergelijken als standaard, of om de lichtverdwijning als referentie te kennen. Bovendien hebben veel niet-eiwitten ook een bepaald absorptiecapaciteit bij een golflengte van 280 nm en kunnen interferenties optreden. Vooral de effecten van nucleozuren (purines en pyrimidines) zijn ernstiger. De absorptie bij 280 nm is 10 keer sterker (per gram) dan eiwitten, maar het nucleozuur is sterker bij 254 nm, met een absorptie-piek in de buurt van 254 nm. De lichtverdwijning bij 254nm is twee keer zo groot als bij 280nm.

De absorptie van eiwitten van 280 nm is groter dan die van 254 nm.

Meestal.：

Lichtabsorptieverhouding zuiver eiwit: A280/A254" 1,8

Lichtabsorptieverhouding van zuiver nucleozuur: A280/A254 0,5

Dus wanneer nucleozuren tegelijkertijd aanwezig zijn in eiwitoplossingen (in de meeste biologische systemen), moet OD254nm tegelijkertijd worden gemeten met OD280nm. Vervolgens wordt het echte eiwitgehalte berekend op basis van de verhouding tussen de absorptie van beide golflengten, gecorrigeerd door empirische formules om de effecten van nucleozuren te elimineren.

Eiwitconcentratie: 1,45 x A280 - 0,74 x A254 (mg/ml)

Deze empirische formule is vastgesteld door middel van een reeks gegevens die zijn bepaald door een mengsel van eiwitten (gist enololase) en nucleozuren (gist nucleozuur) in bekende verschillende concentratieverhoudingen.